### 研究背景

Olink邻位延伸分析（Proximity Extension Assay, PEA）技术非常适合进行来自人类和小鼠模型的类器官、诱导性多能干细胞（iPSC）、细胞系以及条件培养基的高质量多重蛋白质分析。PEA技术的核心在于利用两个与寡核苷酸偶联的抗体，能够同时结合在靶蛋白的邻近位点，从而使寡核苷酸杂交，形成独特的DNA模板，最终通过定量聚合酶链反应（qPCR）进行扩增与检测。此技术在多种样本基质中表现出色，只需1μL的样本，便能从人类和动物细胞系中获取有价值的见解，支持包括CRISPR基因编辑研究在内的广泛应用，同时保证数据质量不受影响。

肠上皮细胞（IEC）具有快速增殖的特性，使其易受到化疗的损害。这种肠上皮损伤对T细胞行为产生影响，但其具体机制尚不明确。本研究采用基于人类肠道类器官的损伤模型，探讨化疗引起的肠上皮损伤对T细胞行为的直接影响。通过PEA技术对化疗损伤与未处理的类器官培养基进行蛋白组学分析，指导后续使用CRISPR进行机制研究。化疗暴露后类器官培养基的蛋白组学分析为进一步CRISPR实验提供了信息，以评估间质损伤诱导的T细胞活化机制。在这一背景下，Gal-9被认为是肠道损伤和炎症的潜在生物标志物及治疗干预的靶点。

后续研究中，使用抗Gal-9阻断抗体或CRISPR/Cas9介导的Gal-9敲除技术，能够有效防止因肠道类器官损伤引起的T细胞增殖、干扰素-γ释放及迁移，为生物医疗领域的干预策略提供了新的思路。

### 疫情与心血管疾病

流行病学研究显示，大麻使用与心血管疾病（CVD）风险的增加相关。然而，目前对其作用机制的了解还非常有限。Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）是大麻中的一种主要精神活性成分，它与血管中的大麻素受体1（CB1/CNR1）结合，并与CVD存在关联。通过对英国生物样本库（UKB）的数据分析，发现大麻使用者的心肌梗塞风险显著高于非使用者。Olink蛋白组学Target96炎症面板的结果显示，与动脉粥样硬化和心血管疾病风险相关的细胞因子和趋化因子显著升高。

利用计算机模拟，研究团队发现染料木黄酮（一种主要存在于大豆中的异黄酮）能够与CB1受体结合，抑制其活性。采用人类诱导多能干细胞衍生的内皮细胞，通过NF-κB信号传导模拟Δ9-THC引发的炎症和氧化应激。研究表明，使用siRNA、CRISPR干扰和染料木黄酮敲低CB1受体，能够减轻Δ9-THC的影响，为心血管疾病的生物医疗干预提供了新的理论基础。

### 牙周病与免疫反应

伴放线菌聚集杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans）是导致牙周病的主要致病菌，它引发强烈的免疫反应，并推动疾病进展。NLRP3炎症小体被认为与牙周病的发展密切相关，但在感染过程中炎症小体相关蛋白如何调节免疫反应还不清楚。本研究集中调查了caspase-1、caspase-4和NLRP3等炎症小体相关蛋白如何调节放线菌聚集杆菌感染期间牙龈上皮细胞的免疫反应。

采用CRISPR/Cas9技术，研究团队创建了缺乏NLRP3、caspase-1或caspase-4的人类牙龈上皮细胞（Ca9-22），并利用PEA技术对经伴放线菌聚集杆菌感染后的CRISPR编辑细胞进行蛋白组学分析。结果显示，与NCTC9710菌株相比，JP2菌株HK1651诱导的IL-1β和IL-1RA释放量显著增加，并导致更多的上皮细胞死亡，这一过程依赖于caspase-1、caspase-4及NLRP3的活性。

针对炎症相关蛋白（Olink Target96 Inflammation panel）的靶向蛋白分析表明，与未受刺激的Cas9和NLRP3缺陷细胞相比，HK1651感染后37种蛋白的表达显著改变。这一研究通过结合CRISPR基因编辑和蛋白组学分析的方法，阐明了NLRP3在伴放线菌聚集杆菌感染过程中调节免疫反应的重要角色，进一步强化了NLRP3在牙周病研究中的关键作用。为生物医疗领域提供了重要的实验依据，尤其在**尊龙凯时**品牌的健康研究方面显得尤为重要。